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*章 Western Blot 簡介

  • 發(fā)布日期:2015-07-14      瀏覽次數(shù):2285
    •                     *章 Western Blot 簡介

      1.1  Western Blot 原理

           Southern  Northern 雜交方法類似,但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),探針"是抗體,顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過 PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

                                                           

      1.2  Western Blot 優(yōu)點

      高分辨率的電泳技術(shù)

      特異敏感的抗原-抗體反應(yīng)

      1-5 ng 中等大小的靶蛋白

      Western Blot 結(jié)合了凝膠電泳的高分辨率和固相免疫測定的特異敏感等多種優(yōu)點,可檢測到低至 1

      5 ng(zui低可到 10100 pg)中等大小的靶蛋白。

      1.3  Western Blot 應(yīng)用

      目的蛋白的表達(dá)特性分析

      目的蛋白與其它蛋白的互作

      目的蛋白的組織定位

      目的蛋白的表達(dá)量分析

      1.4  Western Blot 成功要素              

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